Питательная среда
Необходимыми условиями для точной оценки морфологии клеток при цитологическом и иммуноцитохимическом исследованиях являются высокое качество и адекватность мазка. Качество цитологической диагностики зависит от многих причин: получения материала, фиксации и окрашивания, методики просмотра материала, опыта цитолога и правильности интерпретации, правильной формулировки диагноза, использования дополнительных, современных методов исследования.
Попытки избежать подобных ошибок привели к разработке целого арсенала новых жидкостных технологий (Prep Stein, Cytospin, Novo prep и т.д.), нацеленных на улучшение качества и адекватности цитопрепаратов. Однако все жидкостные технологии предлагают транспортные среды для биоматериала, обязательно содержащие в своем составе алкоголь. Проведение исследований на системе Cytospin, уже после первых опытов показало невозможность использования предложенной фирмой «Shandon» среды накопления, использование которой вызывало полную деформацию, как ядра, так и цитоплазмы клеток опухоли, что затрудняло рутинный цитологический анализ полученного материала, не говоря уже об оценке иммунных реакций.
Данный «эффект агрессии» связан с химическими свойствами предложенной среды, состоящей из Denatured ethanol 10% et Polyethylene glycol 5%, рассчитанной на стабилизацию и фиксацию патологически неизмененных клеток плоского и цилиндрического эпителия гинекологических мазков. В случае же с морфологически измененными опухолевыми клетками с признаками атипии и дистрофии, данный состав среды не приемлем ни для цитологического, ни для иммуноцитохимического исследований.
Это послужило причиной поиска новой среды накопления, ликвидирующей этот недостаток. В нашем отделении разработан и запатентован новый состав среды накопления (заявка №2003113164\15 от 05.05.03, патент на изобретение № 2246110 «Питательная среда накопления образца клеток для последующего цитологического и\или иммуноцитохимического анализа», решение о выдаче от 19.05.04). Все цитоспиновые препараты, используемые в цитологических и ИЦХ исследованиях, приготовлены с использованием данной питательной среды накопления.
| Разработанный состав питательной среды обладает рядом достоинств: |
| Клетки полностью сохраняют свои морфологические, биохимические и биологические свойства, не изменяя иммунной специфичности, что очень важно для проведения иммунологических исследований. |
| Возможность сохранения и транспортировки клеток в данной среде в течение 1 – 2 суток. |
| Возможность длительного хранения при температуре 4°С. |
| Полученная нами питательная среда накопления может быть рекомендована для использования в жидкостной системе приготовления высококачественных цитоспиновых препаратов, с целью последующего проведения цитологических и иммуноцитохимических исследований. |
Биоматериал после пункции помещают в пробирку, содержащую среду ТПС-1, инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем центрифугируют. Осажденные клетки переносят в ячейки рабочей зоны биочипа.
|
№ дня исслед.\ t°C ислед. |
Цитограмма серозного рака яичников. (Х200). | Иммуноцитохимия, экспрессия СК7. (Х200). |
|
1 день/+23°C Рак яичника.
|
 |
 |
|
3 день/+23°C
|
 |
 |
|
5 день/+23°C
|
 |
 |
| 7 день/+23°C
|
 |
 |
.